Histotechnik (eBook)

Gudrun Lang ist Biomedizinische Analytikerin (MTA) und seit Jahren in einem Histologischen Labor in einem großen Krankenhaus tätig. Sie hat ihr fachliches Wissen und ihre Erfahrungen in diesem Buch gesammelt und gibt sie KollegInnen und BerufsanfängerInnen praxisnah weiter.

Geleitwort 5
Vorwort 7
Inhaltsverzeichnis 9
Aufgaben der histologischen Technik / Pathologie 10
Ablauf in einem modernen, histodiagnostischen Labor 12
Biochemie 15
A. Aufbau der Zelle 16
1. Schematische Darstellung einer Epithelzelle 16
2. Zellkern (Nukleus) 17
3. Nukleolus 17
4. Cytoplasma 17
5. Endoplasmatisches Reticulum (ER) 17
6. Ribosomen 18
7. Mitchondrien 18
8. Lysosome 18
9. Golgi-Apparat 18
10. Zentriol 19
11. Paraplasma 19
12. Zellmembran 19
13. Mikrovilli 19
14. Gewebe 20
15. Interzellular-Substanz 20
B. Bausteine 20
1. Wasser 20
2. Salze 21
3. Proteine 21
3.1. Aminosäuren 22
3.2. Proteinstruktur 23
3.3. Hydratation 24
3.4. Denaturierung 24
3.5. Proteide 24
3.6. Enzyme 25
4. Kohlenhydrate 26
4.1. Einfachzucker 27
4.2. Zweifachzucker 27
4.3. Mehrfachzucker 27
4.3.1. Glykogen 28
4.3.2. Glykokonjugate (Schleimstoffe) 28
4.3.3. Glykokalix 31
4.3.4. Basalmembran 31
5. Lipide 31
5.1. Triglyceride 32
5.2. Lipoide 33
5.2.1. Phosphatide 33
5.2.2. Ganglioside 33
5.2.3. Sphingolipide 33
5.2.4. Steroide 33
6. Nukleinsäuren 34
C. Zusammenfassung 35
Untersuchungsmaterial 36
A. Gewinnungsart 37
B. Vorbehandlung 39
1. Fixiertes Gewebe 39
2. Natives, unfixiertes Material 39
2.1. Intraoperative Schnellschnittuntersuchung 40
2.2. Natives Material zur direkten mikroskopischen Untersuchung 41
2.3. Zellsuspensionen (Punktionen) 42
C. Vitalzustand 42
1. Tote Zellen, totes Gewebe 42
2. Lebende Zellen 42
D. Einsenderichtlinien 43
E. Faktoren der Vorbehandlung 44
1. Anmeldung im Labor für spezielle Fragestellungen – Ansprechpartner 44
2. Untersuchungsart – fixiert, nativ 44
3. Gewünschte Vorbehandlung 44
4. Art des Fixiermittels – Formalin, Alkohol, Glutaraldehyd 44
5. Menge des Fixiermittels – Einsendegefäße 44
6. Identifikation der Probe – Etiketten, Einsendeschein 45
7. Information zu Klinik und Operation, Orientierung – Einsendeschein 45
F. Sonstiges Probenmaterial 46
1. Obduktionen 46
2. Probenmaterial von Tieren 47
3. Probenmaterial von Pflanzen 47
Fixierung 48
A. Allgemeines 49
B. Fixierung der Gewebe-Bausteine 52
C. Fixiermittel 54
D. Andere Formen der Fixierung 71
Verarbeitung von hartem Gewebe 75
A. Dekalzifikation – Entkalkung 77
1. Entkalkung durch Säure 77
2. Entkalkung durch Chelatbildung 78
3. Prüfung der Entkalkung 80
5. Beschleunigung der Entkalkung 81
8. Schneiden 82
9. Oberflächenentkalken 82
10. Färbung entkalkter Proben 82
11. Untersuchungsmaterial im Histodiagnostiklabor 83
B. Mazeration 84
C. Hartschnitttechnik – Hartschlifftechnik 85
1. Geräte zur Präparatherstellung 85
2. Beispiele für Knochenverarbeitung 86
3. Färbungen an unentkalkten Schliffpräparaten 87
3.1. Toluidinblau-Färbung 87
3.2. Masson-Goldner-Trichromfärbung (Bindegewebsfärbung) 87
3.3. von Kossa - Färbung 87
3.4. Färbung nach Giemsa 88
3.5. Hämatoxylin-Eosin-Färbung 88
4. Färbungen an Methacrylatschnitten von unentkalkten Knochenbiopsien 88
5. Fluoreszenz-Markierung in Knochen 88
6. Autoradiografie 89
7. Kontaktradiografie 89
8. Histomorphometrische Methoden am unentkalkten Knochen 89
D Makroskopische Begutachtung – Vom Fläschchen in die Kassette 91
Einbettungsprozess 95
A. Paraffinwachseinbettung 97
1. Nachbehandlung nach Formalin-Fixierung 97
2. Beispiel eines Einbettungsprotokolls 97
3. Faktoren des Einbettungsprozesses 98
3.1. Prinzip 98
3.2. Gewebe 98
3.3. Reagenzien 98
3.4. Prozessbedingungen 99
4. Arbeitsschritte 100
5. Automation 103
6. Ausgießen, Einblocken (Embedding) 106
7. Tissuearray (Multigewebeblock) 109
B. Gelatine-Einbettung 111
C. Agar-Einbettung 112
D. Celloidin-Einbettung (Nitrocellulose) 113
E. Polyethylenglykol-Einbettung (PEG) 114
F. Polyesterwachs-Einbettung 115
G. Kunststoff-Einbettung 116
H. Übersicht - Processing-Reagenzien 128
Mikrotomie 132
A. Einbettmedien - Schnittdicken 133
B. Mikrotom 134
C. Mikrotommesser 141
D. Schneidetechnik 146
E. Anhaften der Schnitte am Objektträger 161
F. Laser Capture Microdissection (LCM) 166
Histologische Färbung 168
A. Geschichtliches 170
B. Farbstoffe 171
C. Färbetheorie 179
D. Vorbehandlung 188
E. Färbeprotokolle 189
F. Übersichtsfärbung: Hämatoxylin – Eosin – Färbung 192
G. Spezialfärbungen 198
H. Bindegewebe- und Stützgewebe-Darstellung 204
K. Amyloid-Darstellung 222
M. Mikroorganismen-Darstellung 230
N. Darstellung neurologischer Strukturen 233
O. Nukleinsäuren-Darstellung 236
P. Darstellung von biogenen Aminen 237
Q. Darstellung funktioneller Gruppen 238
S. Nachbehandlung der Schnitte 239
T. Färbeautomaten 242
U. Färbung in der Elektronenmikroskopie 244
Enzymhistochemie 246
A. Enzyme 247
B. Indikationen 248
C. Fixierung 248
D. Nachweisprinzip 249
E. Phosphatasen 253
F. Esterasen 255
G. Oxidoreductasen 258
Immunhistochemie 266
A. Prinzip 267
B. Anwendung der Immunhistochemie 268
C. Antikörper 269
D. Begriffe 277
E. Fixierung, Processing, Schneiden in der Immunhistologie 279
F. Antigen-Demaskierung 281
G. Methoden 284
H. Amplifikationsmethoden 292
K. Bearbeitung von zytologischem Material und Gefrierschnitten 299
L. Protokoll-Beispiel für LSAB-Methode 300
M. Automation 301
In Situ Hybridisierung 304
A. Anwendungen 305
B. Prinzip 307
C. Ablauf 311
D. Automation 318
E. In-situ-PCR 319
F. Extraktion von Nukleinsäuren aus fixiertem Gewebe 319
G. Microarrays 321
H. Begriffe 324
Zellkultur 328
A. Technik 329
B. Anwendungsbeispiele 337
C. Gewebe- und Organkulturen 339
D. Begriffe 340
Mikrowellentechnik 342
A. Mikrowellen-Physik 343
B. Faktoren der Energieaufnahme 344
D. Mikrowellenherde 346
E. Praktisches Arbeiten mit Mikrowellen 348
F. Anwendungen 349
Mikroskopie 353
A. Hellfeldmikroskop 354
B. Dunkelfeldmikroskop 355
C. Phasenkontrastmikroskop 355
D. Interferenzkontrastmikroskop 355
E. Polarisationsmikroskop 356
F. Fluoreszenzmikroskop 356
G. Konfokales Raster-Lasermikroskop 356
H. Stereomikroskop 357
I. Elektronenmikroskop 357
J. Digitale Bildgebung 361
Qualitätssicherung im Labor 363
A. Projekt 364
B. Produkt 367
C. Prozesse 369
D. Projektteam 370
E. Dokumente 373
F. Faktor Mensch 374
G. Begriffe 375
Sicherheit im histologischen Labor 380
A. Chemische Arbeitsstoffe 382
B. Biologische Arbeitsstoffe 394
C. Wohlfühlfaktor am Arbeitsplatz 396
D. Gesetzliche Richtlinien 397
E. Aufstellung von Chemikalien im Histolabor 399
Geschichte der histologischen Technik 415
A. Zeittabelle 416
Quellen 423
Abkürzungen 420
Bildnachweis 431
Sachverzeichnis 432