This third volume in the trio covering G proteins, features integrated approaches to studying G proteins. Methods pertaining to signaling mechanisms are presented, including theoretical and modeling approaches, biochemistry and molecular biology, and cell biology and physiology. The techniques for studying the structure and function of G proteins are important not only to those with specific research interests in them, but also endocrinologists and pharmacologists conducting research on signaling mechanisms that are increasingly understood to interact with G proteins.
Front Cover 1
G Protein Pathways 4
Copyright Page 5
Table of Contents 6
Contributors to Volume 345 12
Preface 18
Volume in Series 22
Section I: Modeling Intracellular Signaling Pathways 42
Chapter 1. Use of Kinetikit and GENESIS for Modeling Signaling Pathways 44
Section II: Phosphodiesterases 66
Chapter 2. Assays of G Protein/cGMP–Phosphodiesterase Interactions 68
Chapter 3. Assaying G Protein–Phosphodiesterase Interactions in Sensory Systems 78
Section III: Calcium and Potassium Channels 90
Chapter 4. Studies of Endogenous G-Protein-Mediated Pathways in Neurons by Whole-Cell Electrophysiology 92
Chapter 5. Biochemical Approaches to Study Interaction of Calcium Channels with RGS12 in Primary Neuronal Cultures 101
Chapter 6. Assaying Phosphatidylinositol Bisphosphate Regulation of Potassium Channels 112
Section IV: Adenylyl Cyclases 134
Chapter 7. Purification of Soluble Adenylyl Cyclase 136
Chapter 8. Calcium-Sensitive Adenylyl Cyclase/Aequorin Chimeras as Sensitive Probes for Discrete Modes of Elevation of Cytosolic Calcium 146
Chapter 9. Kinetic Analysis of the Action of P-Site Analogs 153
Chapter 10. Expression, Purification, and Assay of Cytosolic (Catalytic) Domains of Membrane-Bound Mammalian Adenylyl Cyclases 168
Chapter 11. Identification of Putative Direct Effectors for G?o, Using Yeast Two-Hybrid Method 181
Chapter 12. Identification of Transmembrane Adenylyl Cyclase Isoforms 191
Chapter 13. Functional Analyses of Type V Adenylyl Cyclase 201
Chapter 14. Photoaffinity Labeling of Adenylyl Cyclase 229
Chapter 15. Crystallization of Complex between Soluble Domains of Adenylyl Cyclase and Activated Gs? 239
Chapter 16. Generation of Adenylyl Cyclase Knockout Mice 247
Chapter 17. Construction of Soluble Adenylyl Cyclase from Human Membrane-Bound Type 7 Adenylyl Cyclase 272
Chapter 18. Genetic Selection of Regulatory Mutants of Mammalian Adenylyl Cyclases 282
Section V: Phospholipases and Lipid-Derived Products 294
Chapter 19. Expression and Characterization of Rat Brain Phospholipase D 296
Chapter 20. G-Protein-Coupled Receptor Regulation of Phospholipase D 306
Chapter 21. Analysis and Quantitation of Ceramide 316
Chapter 22. Assays for Phospholipase D Reaction Products 335
Chapter 23. Determination of Strength and Specificity of Membrane-Bound G Protein–Phospholipase C Association Using Fluorescence Spectroscopy 347
Chapter 24. Assays and Characterization of Mammalian Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate-Sensitive Phospholipase D 369
Chapter 25. Characterization and Purification of Phosphatidylinositol Trisphosphate 5-Phosphatase from Rat Brain Tissues 376
Section VI: Small GTP-Binding Proteins 388
Chapter 26. Assay of Cdc42, Rac, and Rho GTPase Activation by Affinity Methods 390
Chapter 27. Assays of ADP-Ribosylation Factor Function 400
Chapter 28. Functional Characterization of p115 RhoGEF 412
Chapter 29. Nonisotopic Methods for Detecting Activation of Small G Proteins 424
Chapter 30. BIG1 and BIG2: Brefeldin A-Inhibited Guanine Nucleotide-Exchange Proteins for ADP Ribosylation Factors 438
Chapter 31. Functional Interaction of G?13 with p115RhoGEF Determined with Transcriptional Reporter System 445
Section VII: Protein Kinases and Phosphatases 452
Chapter 32. Analysis of c-Jun N-Terminal Kinase Regulation and Function 454
Chapter 33. Double-Label Confocal Microscopy of Phosphorylated Protein Kinases Involved in Long-Term Potentiation 467
Chapter 34. Regulation of Mitogen-Activated Protein Kinases by G-Protein-Coupled Receptors 478
Chapter 35. Analysis of Protein Kinase B/Akt 489
Chapter 36. Direct Stimulation of Bruton’s Tyrosine Kinase by G Protein ? Subunits 505
Chapter 37. Isozyme-Specific Inhibitors and Activators of Protein Kinase C 511
Chapter 38. Assay of Raf-1 Activity 531
Chapter 39. Analyzing Protein Kinase C Activation 540
Chapter 40. Assays for Protein-Tyrosine Phosphatases 548
Chapter 41. Differential Display of mRNAs Regulated by G-Protein Signaling 562
Chapter 42. Gene Profiling of Transgenic Mice with Targeted Expression of Activated Heterotrimeric G Protein ? Subunits Using DNA Microarray 570
Chapter 43. Retroviral Vectors Applied to Gene Regulation Studies 580
Chapter 44. Overexpression of Tightly Regulated Proteins: Protein Phosphatase 2A Overexpression in NIH 3T3 Cells 592
Chapter 45. Monitoring G-Protein-Coupled Receptor Signaling with DNA Microarrays and Real-Time Polymerase Chain Reaction 597
Chapter 46. cAMP Response Element-Mediated Gene Expression in Transgenic Reporter Gene Mouse Strain 611
Chapter 47. Functional Genomic Search of G-Protein-Coupled Receptors Using Microarrays with Normalized cDNA Library 626
Author Index 642
Subject Index 676
Erscheint lt. Verlag | 15.10.2001 |
---|---|
Sprache | englisch |
Themenwelt | Medizin / Pharmazie |
Naturwissenschaften ► Biologie ► Biochemie | |
Naturwissenschaften ► Biologie ► Genetik / Molekularbiologie | |
Naturwissenschaften ► Biologie ► Zellbiologie | |
Naturwissenschaften ► Physik / Astronomie ► Angewandte Physik | |
Technik | |
ISBN-10 | 0-08-049693-8 / 0080496938 |
ISBN-13 | 978-0-08-049693-1 / 9780080496931 |
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