Die trypanoziden Wirkungen von Antikörpern gegen T. brucei-rekombinantes Tubulin

T. b. brucei alpha und beta tubulin Gene wurden in E. coli unter Verwendung des pTrP2 Expressionsplasmids und 3-beta-Indoleacrylsäure als Induktor exprimiert. Die exprimierten Tubuline wurden durch SDS-PAGE analysiert und durch Western Blot bestätigt, wobei sie eine identische scheinbare Molekülmasse von 50 kDa hatten. Die exprimierten Tubuline wurden einzeln in 8 M Harnstoff gelöst und 20-fach verdünnt, wonach sie konzentriert und ausgiebig gegen MES-Puffer dialysiert wurden. Nach der Dialyse betrug die durchschnittliche Ausbeute für Alpha- und Beta-Tubulin 0,7 g pro Liter Kultur. Polyklonale Antikörper wurden in jedem der 56 Kaninchen hergestellt, die mit drei Dosen der konzentrierten Tubuline entweder bei 150 & mgr; g oder 450 & mgr; g pro Immunisierung pro Tier immunisiert waren. Die Wirkung dieser Antikörper auf T. b. Das Wachstum von Brucei wurde durch Kultivieren von T. b. Brucei-Blutkreislauf bilden sich in bis zu 25% der von Kaninchen gezüchteten Antiseren. Die Antiseren der anderen Kaninchen hemmten T. b nicht. Brucei Wachstum in der Kultur. Diese Ergebnisse zeigen, dass Antikörper gegen bakteriell exprimiertes Trypanosomentubulin für T. b möglicherweise nicht zytotoxisch sind. Brucei.