Die Interdependenz zwischen zahnärztlicher Behandlung und Herpesreaktivierung (eBook)

Dr. Christoph Thiemann, M.Sc. wurde nach dem Studium der Humanmedizin und Zahn- Mund- und Kieferheilkunde an der Westfälischen Wilhelms-Universität Münster und der Universität Witten/Herdecke 2006 zum Zahnarzt approbiert. Während des Studiums war er zwei Jahre als Studentischer Senator der Universität Witten / Herdecke tätig. 2007 erfolgte die Promotion am Institut für Mikrobiologie und Virologie der Universität Witten/Herdecke. Nach Aufenthalten an der School of Dental Medicine - University of Pennsylvania (Philadelphia, USA) und der School of Dental Medicine - Harvard University (Boston, USA), absolvierte er seine seine Assistenzarzttätigkeit in der Gemeinschaftspraxis und Privatzahnklinik Unna. Seit 2009 ist er in einer Praxis für Mund- Kiefer- Gesichtschirurgie in Dortmund tätig und erhielt die Weiterbildungsbestätigung in Fach- und Sachkunde für digitale Volumentomografie am International Medical College Münster. Nach dem postgradualen universitären Master-Studium an der Donau-Universität Krems wurde er 2010 zum Master of Science Orale Chirurgie / Implantologie ernannt. Dr. Thiemann, M.Sc. ist Autor von nationalen und internationalen Veröffentlichungen und Kongreßbeiträgen und seit 2010 als Referent auf dem Gebiet der Hygiene in der Zahnheilkunde tätig. Seit 2011 hat er eine Visiting-Professur an der an der Danube Private University (DPU) – Fakultät Medizin/Zahnmedizin, Krems übernommen und besitzt einen Lehrauftrag an der Universität Witten/Herdecke.

Die Interdependenz zwischen zahnärztlicher Behandlung und Herpesreaktivierung Klinische und subklinische Reaktivierungen von HSV1 1
Inhaltsverzeichnis 5
1 . Liste der Abkürzungen 8
2. Einleitung 10
2.1 Herpesviren 10
2.2 Pathogenese des Herpes-simplex-Virus Typ 1 11
2.2.1 Primärinfektion 11
2.2.2 Replikation und Latenz 13
2.2.3 Reaktivierung 13
2.2.4 Triggerfaktoren 15
2.4.5 Therapie 16
2.3 Ziel der Arbeit 17
3. Material und Methoden 18
3.1 Material 18
3.1.1 Geräte 18
3.1.2 Verbrauchsmaterialien 19
3.1.3 Chemikalien, Enzyme und andere biochemische Agenzien 20
3.1.4 Puffer und Lösungen 21
3.1.5 Virus 23
3.2 Methoden 24
3.2.1 Klinik 24
3.2.2 Molekularbiologie 25
3.2.3 Serologie 32
4. Ergebnisse 33
4.1 HSV-1-Rekrudeszenzen 33
4.2 HSV-1- Serologie 33
4.3 HSV-1-PCR 33
4.4 Auswertung einer HSV-Nested-PCR mit anschließender Hybridisierung unter Anwendung einer DIG-markierten-DNA-Sonde 37
5. Diskussion 39
5.1 Untersuchungsdesign 39
5.1.1 Methodik der PCR – allgemeiner Teil – 40
5.1.2 Zusammenhang zwischen Pathomechanismus der Reaktivierung von HSV-1 und diagnostischer Methodik 41
5.2 Frequenz der subklinischen und klinischen Reaktivierungen von HSV-1 43
5.3 Triggerfaktoren einer HSV-1 Reaktivierung 45
5.4 Ausblick 47
6. Zusammenfassung 48
7. Literaturverzeichnis 49

Textprobe Kapitel 3.2.2.4, HSV-1 Southern Blotting: Unter UV-Licht wurden die DNA-Bande aus dem Agarosegel herausgeschnitten. Denaturierung Um die Doppelstränge der DNA zu trennen, wurden - vor dem Transfer auf die Nylonmembran - die DNA-haltigen Gelstücke zweimal für je 30 min in Denaturierungspuffer bei 21 ° C inkubiert. Die Gelstücke wurden für ca. 15 min in Southern Transfer Puffern geschwenkt, danach die einzelsträngige DNA mit Hilfe des S&S Turbo Blotters alkalisch auf eine Nylonmembran transferiert. Die Nylonmembran wurde gleichzeitig in destilliertem Wasser angefeuchtet. Der Turbo Blotter wurde folgendermaßen beschickt: 20 dicke Filterpapierblätter, 4 dünne Blätter und ein dünnes, in Transferpuffer angefeuchteten Blatt. Die angefeuchtete Nylonmembran wurde darauf gelegt und mit den feuchten Gelstücken bestückt. Dabei ist darauf zu achten, dass Luftblasen vermieden werden. Die Schichtung wurde um 3 im Puffer genässte dünne Filterpapiere ergänzt. Den Abschluss bildete ein großes Filterpapierblatt. Die Enden dieses Papierblattes reichten auf beiden Seiten in eine mit Transferpuffer gefüllte Wanne, um die Kapillarkräfte während des Blottens aufrecht zu erhalten. Schließlich wurde eine zum Blotter gehörige Deckpappe (Wick Cover) aufgelegt. 2. Neutralisierung Nach 70 min wurde der Transfervorgang gestoppt und die Nylonmembran für 5 min in Neutralisationspuffer gelegt und gewaschen. 3.Cross-linking und Trocknung Die Membran wurde zur DNA-Fixierung für einige Minuten unter UV-Licht gelegt und zusätzlich bei 80 ° C für 20 min im Heissluftschrank getrocknet. 4. Prähybridisierung Die Inkubation der geblotteten Nylon-Membran fand für 60 min in Vorhybridisierungslösung bei 68 ° C im Wasserbad statt. Um die Doppelstränge der Sonden-DNA zu trennen, wurden pro Membran 12 µl Sonde in 12 ml Prähybridisierungslösung gegeben und für einige Minuten aufgekocht. 5. Hybridisierung Die Hybridisierung der DNA erfolgte bei leichtem Schwenken mit digoxygenin-markierter DNA-Sonde und vollzog sich in einem Wasserbad bei 68 ° C für 16 - 24 Stunden. Bei der DNA-Sonde handelte es sich um eine Plasmid-DNA, die die komplementäre HSV-1-gB-Sequenz enthielt.